Aislamiento e identificación de microorganismos productores de polihidroxialcanoatos

Se aislará e identificará microorganismos productores de polihidroxialcanoatos (PHA) a partir de una muestra de suelo de cultivo de trigo de la ciudad de Otuzco. Las muestras se enriquecerán en medio Derx, luego a partir de este medio se harán diluciones y se sembrará en medio libre de Nitrógeno procediendo a incubar a 30 °C de 2 a 7 días. Por otro lado, también a las muestras se le harán diluciones con agua destilada estéril y se sembrarán por superficie en agar nutritivo y agar Sabouraud. Se realizará tinción Gram y Negro de Sudán B de las colonias aisladas en los tres medios de cultivo. Luego se hará una identificación preliminar mediante pruebas bioquímicas y posteriormente se identificarán molecularmente. Para la producción de polihidroxialcanoatos (PHA) se prepararán inóculos a partir de todos los microorganismos aislados e identificados preliminarmente y se sembrarán en diferentes balones con medio Burx, se pondrán a incubar en agitación a 300 rpm por 7 días a temperatura ambiente. Para la extracción de PHA se centrifugará el contenido de los balones, se descartará el sobrenadante y al precipitado se le agregará una solución de lejía y cloroformo. Luego se dejará reposar hasta que se forme dos fases, se trabajará con el precipitado, el cual se pondrá a secar en una placa Petri para obtener el PHA. Los microorganismos productores de PHA serán identificados molecularmente a través del programa BLAST y el análisis de datos se realizará mediante el programa estadístico SPSS.